人8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)ELISA試劑盒檢測(cè)原理、操作步驟
以下是關(guān)于人8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū),結(jié)合檢測(cè)原理、操作步驟及注意事項(xiàng)進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明:
一、?檢測(cè)原理?
采用?雙抗體夾心法?或?競(jìng)爭(zhēng)法?(不同品牌可能差異):
夾心法?:包被抗體捕獲樣本中的8-OHdG,再與酶標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物,通過(guò)底物顯色(TMB)測(cè)定吸光度(OD值),濃度與顏色深度正相關(guān)?。
競(jìng)爭(zhēng)法?:樣本中的8-OHdG與生物素標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗體,OD值與濃度負(fù)相關(guān)?。
二、?試劑盒組成?
組分? ?說(shuō)明?
預(yù)包被微孔板? 12孔×8條,含抗8-OHdG抗體?。
標(biāo)準(zhǔn)品? 濃度梯度(如0-4000pg/ml或0-200ng/L),需按說(shuō)明書(shū)稀釋?。
酶標(biāo)試劑/檢測(cè)抗體? HRP標(biāo)記抗體,避光保存?。
洗滌液? 30倍濃縮,需稀釋后使用?。
顯色液(TMB)? A液(H?O?)與B液(TMB)需等體積混合?。
終止液? 2N H?SO?,顯色后終止反應(yīng)?。
三、?樣本處理要求?
血清/血漿?:離心(3000rpm, 10分鐘)去除顆粒,避免溶血或反復(fù)凍融?。
細(xì)胞上清/組織勻漿?:離心后取上清,分裝保存于-20℃?。
禁用NaN3?:會(huì)抑制HRP酶活性?。
四、?操作步驟?
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:按說(shuō)明書(shū)梯度稀釋(如4000→62.5pg/ml),設(shè)復(fù)孔?。
加樣?:每孔加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μl,37℃孵育120分鐘?。
洗滌?:拍干后加洗滌液浸泡1-2分鐘,重復(fù)4-6次?。
顯色?:加TMB工作液100μl,37℃避光反應(yīng)15-30分鐘?。
終止與檢測(cè)?:加終止液50μl,30分鐘內(nèi)測(cè)450nm OD值?。
五、?結(jié)果計(jì)算?
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線,計(jì)算樣本濃度?。
靈敏度?:檢測(cè)限通常為30-45.8pg/ml?。
重復(fù)性?:板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%?。
六、?注意事項(xiàng)?
質(zhì)量控制?:每次實(shí)驗(yàn)需做標(biāo)準(zhǔn)曲線及空白對(duì)照?。
密封保存?:開(kāi)封板條需干燥密封,避免受潮?。
溫度控制?:試劑盒保存于2-8℃,避免凍存酶標(biāo)試劑?。
僅限科研?:不可用于臨床診斷?。
以上步驟需嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū),不同品牌可能存在細(xì)節(jié)差異?。
注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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